自1986年第一个治疗性抗体进入临床以来，抗体药物得到了迅速的发展。迄今为止，近百个治疗性抗体药物成功问世，抗体药物成为了现代生物医药的重要组成部分。经过多年的发展，抗体药物的下游纯化技术逐渐形成以经典三步层析为主的成熟工艺。为达到理想的纯化效果和成本控制，工业上对该工艺中的三种层析介质的载量、寿命、分辨率等方面提出了很高的要求。在这三种层析介质中，Protein A亲和层析介质占据了主导地位，可谓是皇冠上的明珠。
抗体药物的工业大规模纯化对Protein A亲和层析介质的要求往往表现在三个方面：更高的载量，以应对更大的培养液处理能力;更高的耐碱性，以应对更好的CIP和更多的重复使用性能;更强的基球强度，以应用于更快的操作速度。东富龙千纯针对三个方面的要求，推出了经典的、具有广泛行业认同的Rigose MabPureA LX填料。
Rigose MabPureA LX是一种将耐碱性改造的重组蛋白A键合在高刚性琼脂糖微球上形成的亲和层析介质，其不仅可以耐受0.1-0.5 M NaOH清洗，且其配基在剧烈洗脱及清洗条件下脱落率低，具有高强度、高载量、高耐碱性等优点，主要用于从细胞培养液中规模化捕获抗体。
01 不同保留时间下的载量
填料的载量是评估纯化生产能力的重要指标之一，更高的载量可以提高生产效率节约生产成本。以hIgG作为样品，通过检测不同保留时间下样品流穿的情况来获得相应的载量，可以发现，与国外某品牌同类产品相比，Rigose MabPureA LX具有更高的载量优势。
02 使用寿命和稳定性
CIP是填料清洁非常重要的步骤，Rigose MabPureA LX可以用0.1-0.5M NaOH进行再生。我们用0.1M NaOH接触15min结合平衡和低pH洗脱来验证填料使用寿命，并且与国外某品牌进行平行对比。通过选定相应循环次数，用hIgG进行载量测定，结果发现，500次循环后Rigose MabPureA LX仍能保持80%以上的载量。
将Rigose MabPureA LX在0.2M NaOH下分别浸泡24h，48h，72h，然后进行载量测定，并且用国外某品牌同类产品进行对照，结果发现，经过72h浸泡后Rigose MabPureA LX载量仍能保持80%左右。
03 收率分析
以CHO细胞培养液上清作为样品，通过对三个批次的Rigose MabPureA LX和国外国内同类型填料在pH3.5洗脱下的收率进行测定，结果发现，Rigose MabPureA LX的收率处于较高水平，并且批次间的稳定性好。
04 纯化后聚体分析
亲和层析步骤中聚体的占比是非常重要的指标，而控制单抗聚体含量，一方面是为降低杂质，提高纯度;另一方面是因为在治疗过程中，聚体的存在不仅会降低药物的效果，还会引起机体的免疫反应，具有潜在的副作用。选择三个批次Rigose MabPureA LX，用CHO细胞培养液上清作为样品，对pH3.5的洗脱下来的抗体，进行了聚体含量的测定，结果发现，经Rigose MabPureA LX纯化后聚体含量都在0.5%以下，对比国外和国内的同款填料，Rigose MabPureA LX聚体含量都处在较低水平。
05 生产批次稳定性
生产批次的稳定性对于客户的纯化生产至关重要，通过稳定的生产工艺控制和严谨的检测，可以更好的保证Rigose MabPureA LX产品的质量和稳定性。
06 应用案例
目前，单抗的层析工艺已经较为成熟，其中经典的三步法层析是公认高效、稳定、平台化的工艺方法，应用也较为成熟，使用Rigose MabPureA LX、Rigose Q、Rigose SP Plus三步法来纯化单抗，收率及HCP、内毒素等残留的去除均有不错的效果。
(1)亲和层析
Rigose MabPureA LX亲和层析主要作用是捕获目的蛋白，去除HCP、病毒、HC-DNA和其他杂质
(2)阴离子交换层析
Rigose Q阴离子交换层析去除残留Protein A、HCP、HC-DNA、HC-RNA及内毒素等。
(3)阳离子交换层析
Rigose SP Plus阳离子交换层析目的是进一步去除多聚体、HCP、HC-DNA等
经典三步法纯化结果如下表所示
以下为东富龙千纯为抗体药物纯化提供的三种经典层析介质的性能
(1)Rigose MabPureA LX亲和介质
(2)Rigose Q阴离子交换介质
(3)Rigose SP Plus阳离子交换介质
07 Rigose平台的技术支持
多年的技术深耕让东富龙千纯具备了为生物制药客户提供产品和技术支持的强大能力。无论是对客户工艺的性能验证，还是产品的稳定性验证，Rigose平台都能够为客户提供全方位的服务。Rigose系列层析介质可提供包括产品说明书、质检文件COA、法规文件RSF(Regulatory Support File)等一系列文件体系，为生物药物的验证和报批提供有利的支持。同时，以上抗体纯化填料于2022底通过美国FDA DMF备案(DMF # 037782)，可为抗体药物的中美双报提供有效的支持。
结语
秉持“服务生物医药，品质铸就双赢”宗旨和理念，我们始终将服务客户放在第一位。依靠绿色化层析介质生产工艺和未来国内最大的生物分离介质上海生产基地，东富龙千纯人有信心和能力为中国乃至全球的生物医药行业做出自己的贡献。
（东富龙）
